Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型号糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现肾脏神经性到显现1M-哮喘流行病学患者的成果率在青少年初期就有很好的说明了，多个肾脏神经性HIV的青少年当中有70%在血清转换后10年内中风哮喘，而随访15年的青少年这一百分比减小到84%。相对之下，占流行病学1M-哮喘一半以上的M-1M-哮喘的病症机制还无法得不到充分的学术研究。

越来越多的人开始应用于应于系统设计来定义1M-哮喘的成果：人群在显现多种肾脏神经性时转入第1阶段，显现血糖异常时转入第2阶段，显现患者时转入第3阶段。一些多发肾脏神经性HIV的人群，在1期和2期，成果较慢，并发展为病症的1M-哮喘。我们先前说明了了一第三组在首次样品到多种肾脏神经性取样后至少10年无哮喘的以致于慢成果者，这第三组病人人数少，但外观上以致于为明确。随后，我们发现肾脏自身抗原特异性CD8+T巨噬细胞自由基在成果较慢的病人当中基本不存在，但在近期病症和长期存在的哮喘病人当中很难以样品到。这显然表明，与成果病人相对，这些病人神经性自由基的平衡增强。

早期学术研究表明，尽管平衡性T巨噬细胞(Treg)数量经常性，但哮喘病人存在一些系统设计缺陷，其当中包括对IL-2的自由基意志力降低。此外，哮喘病人当中的震荡CD4+T巨噬细胞显然对平衡不具抵抗性，平庸为震荡T巨噬细胞的消除减弱，自然产生的Treg和体外产生的可借Treg，以及抗原经历的CD4+T巨噬细胞当中IL-2自由基减弱。本学术研究的目的是说明了了CD4+平衡性T巨噬细胞(Treg)在一小群以致于较慢成果者当中的外观上，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX学术研究是一项以人群结合的纵向学术研究，在21岁所列病症的病人亲属当中检查1M-哮喘的小心考量。我们先前说明了了长期较慢成果者的外观上，他们保持多重肾脏神经性HIV超过10年，但无法显现哮喘的流行病学患者，慢性或非开展性神经性。随后，10名之前保持无哮喘并愿意提供大量血液取样的较慢成果者不属于T和B巨噬细胞系统设计量化。在现今的学术研究当中，8名慢成果者(SP第三组)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的肾脏神经性HIV。所有的与会者都处于1M-哮喘成果的1期，尽管一些人随后失去了肾脏神经性对某些抗原的HIV自由基，然而，一名病人已经处于2期至少6年，但无法显现流行病学患者，一名病人被诊断为哮喘，该受试者72岁，在采集实验取样时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在数据量化当中对该供体开展了单独评估。除去外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，转用多参数流式巨噬细胞术和T巨噬细胞消除试验评估供体当中Treg的频率、基因M-和系统设计。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、表征和回归)开展无全权负责聚类量化，评估Treg基因M-。

结果：与身心健康供体相对，来自慢成果体的心灵CD4+T巨噬细胞的全权负责聚类揭示，诱导的心灵CD4+ Treg频率减小，与糖皮质激素可借的TNFR相关复合物(GITR)隐含减小有关。一名HbA1c下降时的病人与成果较慢者和转换的对照第三组相对，Treg谱有所不同。系统设计量化表明，与身心健康供体相对，来自较慢成果体的Treg介导的CD4+震荡T巨噬细胞消除明显受损。平庸为对震荡CD4+T巨噬细胞CD25和CD134隐含的消除减小。

示意图1 熟悉的基因M-量化揭示，CD4+Treg亚M-在慢成果函数调用当中减小。由FlowSOM生成的Treg会议室，聚集在来自所有供体的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据上面物隐含解剖出10个元簇:心灵T巨噬细胞_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +心灵T巨噬细胞;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)应用于9个不同Treg上面生成的10个元簇的MST。每个结点代表一个坦克部队(100个坦克部队)，非常大的元坦克部队(10个元坦克部队)在结点第三组周围成品。每个结点当中的点心示意图表示单个上面的隐含高至。(b)每个元聚类的热示意图，以揭示整体上面隐含。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)生成示意图，以及FlowSOM鉴别的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说同位素为每个metacluster箱中央线示意图(同位素> 0.05%)确定为HD和SP第三组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T巨噬细胞(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T巨噬细胞(l)。紫色边框代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 应用于CITRUS的预测模M-猜测，Treg频率的减小是成果较慢的标志。分级离子通道(a - f)和棉花量化(g-k)非常为SP与会者和转换的HD与会者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)性状CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l人群的指标性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR隐含开展除去，模拟FlowSOM人群。(b) HD(黑点)和SP(黑纹)第三组以及供体SP 606(紫色)当中CD25+ cd127的频率汇总示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离子通道次空集的箱中央线示意图;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度可视，标记突出的簇被鉴别为SP和HD函数调用密切关系的不同。(j)箱中央线示意图揭示了在SP(黑纹)和HD(灰点)第三组当中，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的一般来说同位素(百分比)。(k)直方示意图揭示每个簇的基因M-(粉红色)和Treg上面一般来说隐含与剧中隐含(金色);上列，存储器Treg_3;下面一路上，存储器Treg_4。剧中与所有其他簇当中上面的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

示意图3 与身心健康献血者相对，成果较慢者心灵treg的GITR减小。每个心灵CD4+T巨噬细胞元簇(心灵T巨噬细胞_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +心灵T巨噬细胞;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个隐含上面的波动。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的隐含热示意图(sp606不包括在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇当中所有HD(粉红色)、所有SP(金色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR隐含联接，揭示直方示意图(c)和汇总示意图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(紫色)所有供体包括，p< 0.05(金色)供体SP 606和转换的HD不包括在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR隐含，从分级离子通道，从所有HD(粉红色)、所有SP(金色)和SP 606(紫色)联接，揭示直方示意图(e)和汇总示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

示意图4 来自较慢成果的CD4+ treg巨噬细胞控制震荡CD4+T巨噬细胞的意志力降低。SP第三组用金色的中央线和边框表示，HD第三组用银色的中央线和边框表示，紫色的中央线/边框表示供体sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞开展分选。CD4+CD25−(这样的话者)被上面为CFSE, Treg按检视的百分比起始。用抗CD3 /28微珠活化巨噬细胞，培养3天后开展流式巨噬细胞术样品。(a-d)与CD4+这样的话者一般来说应的treg培养(complex)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培养。(a,b,f) CFSE巨噬细胞分裂(a,e)和CFSE消除倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除倍数。应用于HIV对照(诱导的叛离巨噬细胞都有treg)计算消除倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常为测试

示意图5 震荡CD4+T巨噬细胞对较慢成果的T巨噬细胞活化的消除非常敏感。SP第三组用金色的中央线和边框表示，HD第三组用银色的中央线和边框表示，紫色的中央线/边框表示供体sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞开展分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel上面，treg按检视的百分比起始。用抗CD3 /28微珠活化巨噬细胞，培养3天后开展流式巨噬细胞术(CD25反染)和巨噬细胞因次子量化。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同培养。(a,b) CFSE巨噬细胞分裂(a)和CFSE消除三份(b)。(c,d) CD25消除三份(c)和CD134消除三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在大一当中的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常为测试

论证：我们得出的论证是，来自较慢成果次子的活化心灵CD4+Treg在GITR隐含当中得不到了构建和丰富，强调了进一步学术研究Treg在1M-哮喘风险人群当中的异质性的实质。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28